受體菌感覺態細胞的製備

日期：2025-05-06 00:40

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摘要：

受體菌感覺態細胞的製備

普通地，新製備的感覺態細胞48h後轉化速率減低，15d後失去效力。因為這個，感覺態細胞不可以保留太久，4℃保留一周，但-80℃可保留1年。用玻璃管分裝可防止反反複複凍熔，損因感觸而悲傷受態細胞。

當球菌處於容易借鑒外源DNA的狀況時，即為感覺態，而用理化手眼使球菌處於感覺態的操作為致敏過程。感覺態細胞製備是重組基因能否成功實現轉化的一個關緊的技術環節。本嘗試是經過鈣離子來引誘使之變成感覺態細胞。

材料和辦法

1．材料：結腸杆菌

2．攝譜儀：

離心思，恒溫搖床，恒溫水浴，超淨辦公台，冷櫃

3．試藥

LB營養物質，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高鈷

TFB：10Mm MES（pH6.3）

45Mm MnCl2

10Mm CaCl2

10Mm KCl

操作步驟

結腸杆菌在LB營養物質平板上劃線培育12-16鐘頭，挑取單菌落於LB營養物質搖瓶培育結腸杆菌到對數期。取1ml培育物7000rpm，離心3min，使聚在一起菌體。再重複一次。冰浴安放。用預冷的氯化鎂懸浮菌體7000rpm離心3min。使聚在一起菌體，冰浴安放。用預冷的氯化鈣懸浮菌體，冰浴15min, 7000rpm離心3min。使聚在一起菌體，冰浴安放。參加200μl預冷的氯化鈣（或TFB），安放於冰浴，即得感覺態細胞，此細胞可現用，也可施行下步操作。將懸液分裝於無菌離心管中，投入液氮，而後儲於-70℃保留。

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