電細目鏡下的質粒DNA形態

電細目鏡下的質粒DNA形態 
 
1、目標

仔細查看質粒DNA 在電鏡下的形態，掌握質粒DNA 的電鏡製樣原理和辦法。
 

球狀氨基酸普通都可以在低鹽溶液或蒸餾自來水表麵形成不溶解的改變性彆薄膜，若液體濃度合宜，則肽鏈延長擴展形成氨基酸單分子層。普通用堿性氨基酸包圍帶陰電的核酸分子，當氨基酸展開時，核酸也隨之展開，核酸的形態結構將維持一定的完整性。而後將核酸分子撈到支持膜上，通過負染色，就可以在電鏡下仔細查看電熱恒溫鼓風乾燥箱。

2、材料、試藥和攝譜儀

1、醇化的質粒DNA 樣品。

2、火棉膠。

3、CH3COOH異戊酯。

4、整潔銅網。

5、真空乾燥箱。

6、CH3COOH鈾水溶液。

7、鉑銥合金。

8、展開貯備液(0.1mg/L細胞色素C，1mol/LCH3COOH銨)。

9、滑石粉。

10、電細目鏡。

3、操作步驟

1、稱取3克火棉膠溶解於100ml的CH3COOH異戊酯中，製成3％的溶液。

2、用小鑷子謹慎地將整潔的銅網間隔一定距離排列在膜上乾燥箱。

3、在這些個銅網上輕輕遮蓋一張合適體積的濾紙，待濾紙潮濕潤澤後將濾紙連同銅網、火棉膠膜輕輕撈起，銅網上進放於一整潔培育皿中晾乾備用。

4、將核酸樣品（液體濃度為5mg/ml-10mg/ml）加到展開溶液中，終液體濃度為1mg/ml.5mg/ml，作為相片比本人好看液。

5、用CH3COOH雙氧氣鈾染色15分鐘，蒸餾水洗3次，每每10分鐘，晾乾備用。

6、用滴管汲取該液，滴1－2滴於保潔的水麵上，當CH3COOH異戊酯揮發後，在水麵上形成一層平均的火棉膠膜。

7、將整潔的載玻片斜放在培育皿中，在自來水表麵撒小量滑石粉，以指使單分子膜的展開事情狀況。

8、將重蒸水灌注整潔的培育皿中，作為下相液。

9、取50ul左右的相片比本人好看液，在離下相液外表1cm處輕輕滴到斜麵上，使相片比本人好看液緩緩觸動到下相液外表並形成一層單分子膜。

10、用小鑷子夾著銅網，膜麵朝下，輕輕沾取下相液外表的核酸分子。用濾紙吸去駢枝的液體，晾乾備用。

11、在真空噴鍍儀中用鉑銥合金投影，以進一步增加電子反差。

12、電鏡仔細查看。