二氧化碳培養箱無汙染控製技術

     二氧化碳培養箱是通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境如穩定的溫度（37°C）、穩定的CO2水平（5%）、恒定的酸堿度（pH值：7.2-7.4）、較高的相對濕度（95%），來對細胞/組織進行體外培養的一種裝置。 廣泛應用於細胞、組織培養和某些特殊微生物的培養，常見於細胞動力學研究、哺乳動物細胞分泌物的收集、各種物理、化學因素的致癌或毒理效應、抗原的研究和生產、培養雜交瘤細胞生產抗體、體外授精（IVF）、乾細胞、組織工程、**篩選等研究領域。 
      支原體：支原體汙染後，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存，培養基一般不發生渾濁，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞已經受到多方麵潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，抑製細胞生長等，往往被大多數實驗者忽視。 
     二氧化碳培養箱中的主要汙染源：**、**（黴菌和酵母菌）、病毒、支原體、非同種細胞。 
     對於細胞來說，非常理想的培養環境同樣也適合這些汙染物的生存，培養箱本身是不會辨彆的，而細胞培養中大部分時間裡細胞都是位於培養箱內，因此箱體內能否抑菌或滅菌非常關鍵！ 
     **：**汙染後，培養基1-2天就會變色，對細胞生長影響明顯，應迅速將汙染細胞與其它細胞係隔離，滅菌後丟棄，還要用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超淨台。      在生物活體內，生物體有自身的**係統保護細胞或組織，但是在體外培養時，冇有任何保護自己的**屏障。對於二氧化碳培養箱的基本參數溫度、CO2 和濕度，大多數培養箱都能滿足研究實驗的需要。然而，針對培養過程中麵臨的各種汙染源，各品牌二氧培養箱的控製方式和效果不儘相同，因此細胞體外培養中*大的威脅實際上是汙染問題。 
      病毒：由於病毒寄生生存，爆發後儘快和正常細胞隔離，丟棄處理，相對來說容易處理，對操作者威脅較大；儘管病毒汙染的細胞不影響原代培養，但生產疫苗是不**的。因此，潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、乾擾素等生物製品製作中的難題。
     **（黴菌和酵母菌）：**生長的比較慢，不象**那麼容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被汙染了；目前冇有好的抑製方法，包括現在常用的兩性黴素，一旦汙染容易反複爆發，尤其孢子很難殺滅。 
     非同種細胞：即細胞交叉汙染，由於細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液冇有嚴格分開，往往會使一種細胞被另一種細胞汙染。目前，世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所汙染，致使許多實驗宣告無效。
因此，以上汙染一旦發生，細胞*後基本隻能丟棄，實驗無法挽救，對於許多取樣困難的實驗損失無法估量！ 
    目前，二氧化碳培養箱的滅菌技術主要有乾熱、濕熱、紫外燈照射、消毒劑擦拭等。 
    高溫乾熱空氣滅菌是目前世界公認的*有效的滅菌技術，能徹底消滅所有微生物汙染源（包括耐高溫的芽孢杆菌）；濕熱滅菌通常用於高壓蒸汽滅菌中，比較少用在CO2培養箱上，濕熱滅菌在常壓下又叫煮沸法，煮沸的水溫一般至少需為100℃，**繁殖體煮沸5分鐘被殺死，但芽胞常需煮沸2小時以上才可被殺死；紫外燈照射法的有效性受很多因素影響，如遮擋、時間、強度、照射距離，濕度等，滅菌效果很難保證；消毒劑擦拭法是對表麵滅菌的方法，適合於平整的表麵如實驗台麵，而箱體內部設計的死角、各種器件因無法擦拭等因素導致滅菌效果也很有限，而且含氯、碘的消毒劑對於不鏽鋼有腐蝕作用，不能對不鏽鋼箱體進行擦拭滅菌。