懸浮培育的細胞或團體單細胞懸液的裂解

日期：2025-05-05 22:58

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摘要：

懸浮培育的細胞或團體單細胞懸液的裂解

（1）於4℃以2000g離心5分鐘使聚在一起細胞，以10倍大小用冰預冷的無鈣鎂離子磷酸緩和衝突液懸沉澱，蕩滌細胞3次，每每均用大口徑的吸管輕輕吹打細胞沉澱，使其徹底散布。

（2）加蛋白酶K至終液體濃度為200μg/ml,充分混勻後置於37℃溫育30分鐘。蛋白酶K以儲存的方式保留，儲存液為20μg/ml蛋白酶K水溶液。

（3）參加與步驟b）所加RNA提出取得緩和衝突液體相同的蛋白酶克化緩和衝突液，用振動器迅疾混勻。姚氏用裝有21號針頭的皮下注射器抽吸細胞裂解物，再將其灌注聚丙烯管內。重複3-4次，剪切DNA.

（4）估計細胞沉澱的大小，用10-20倍大小的RNA提出取得緩和衝突液重懸之。

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