悬浮培育的细胞或团体单细胞悬液的裂解

日期：2025-05-01 15:25

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摘要：

悬浮培育的细胞或团体单细胞悬液的裂解

（1）于4℃以2000g离心5分钟使聚在一起细胞，以10倍大小用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓和冲突液悬沉淀，荡涤细胞3次，每每均用大口径的吸管轻轻吹打细胞沉淀，使其彻底散布。

（2）加蛋白酶K至终液体浓度为200μg/ml,充分混匀后置于37℃温育30分钟。蛋白酶K以储存的方式保留，储存液为20μg/ml蛋白酶K水溶液。

（3）参加与步骤b）所加RNA提出取得缓和冲突液体相同的蛋白酶克化缓和冲突液，用振动器迅疾混匀。姚氏用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物，再将其灌注聚丙烯管内。重复3-4次，剪切DNA.

（4）估计细胞沉淀的大小，用10-20倍大小的RNA提出取得缓和冲突液重悬之。

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